1、一个是溴酚蓝,一个二甲苯青,在琼脂糖浓度为1%-5%时,两者的电泳速度基本恒定。溴酚蓝的速度相当于300bp的条带,二甲苯青指示4000bp的条带。电泳时,看到一前一后的蓝带和青带既是这两个指示剂。
2、l,上样电泳。 测序反应物电泳和序列读取 (1) 按普通聚丙烯酰胺凝胶制作方法制作梯度胶。 (2) 按G、A、T、C次序加入每种样品,在G、A和T各泳道上样1ml,而在C泳道上样5?l。 (3) 上样完毕加压1700V电泳,根据样品中溴酚蓝和二甲苯青染料迁移情况确定电泳时间。
3、琼脂糖凝胶电泳时Maker中的溴酚蓝是起到指示带的作用,以便确定凝胶上的条带跑出来了多少。正常情况下溴酚蓝与二甲苯青要至少存在一种,当然如果上样样品中含有染料,不需要Maker的指示带确定电泳程度,理论上指示剂也是可以不要的。
4、loading buffer 里一般有两个指示剂。一个是溴酚蓝,一个二甲苯青,在琼 脂糖浓度为1%-5%时,两者的电泳速度基本恒定。溴酚蓝的速度相当于300bp的 条带,二甲苯青指示4000bp的条带。电泳时,看到一前一后的蓝带和青带既是 这两个指示剂。
二甲苯青+橙黄不会干扰测序结果。测序结果常见问题:残存的染料单体造成的干扰峰所致,该干扰峰和正常序列峰重叠在一起。另外,测序电泳开始阶段电压有一个稳定期等。混合在一起组成的Mix染料对测序结果没影响。
dna上样缓冲液和rna上样缓冲液可以通用。因为DNA和RNA链上的碱基都基本一致。而这两种上样缓冲液中含有的染料是二甲苯青和溴酚蓝,都可以与其碱基结合,跑出条带。但是,如果使用DNA上样缓冲液,里面会夹杂一些RNA酶,这些酶有可能会影响到实验结果。使用前需要将RNA酶处理掉。
不同DNA有自己相应的条带,比如基因组DNA是一条,质粒一般是2条。而不同大小的DNA有不同位置,越靠前的电泳速度快说明size小,和ladder比较就可以判断自己DNA大小。
不能。根据查询化学网得知:上样缓冲液可以增加样品比重,以确保DNA均匀沉入加样孔内。上样缓冲液可以形成肉眼可见的指示带,预测核酸电泳的速度和位置。样缓冲液可以使样品呈色,使加样操作更方便。
1、溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。希望能够对你有所帮助。
2、在需要电泳的DNA溶液里加上loading buffer,目的是在电泳时可以看到指示带,有两条:跑在前面的蓝色条带是溴酚蓝,位置大约相当于300bp的DNA,后面的绿色条带是二甲苯青FF,相当于4000bp左右大小DNA的位置。
3、溴酚蓝:蛋白电泳染色剂和酸碱指示剂。二甲苯青FF:示踪染料。
4、跑在前面的蓝色条带是溴酚蓝,位置大约相当于300bp的DNA,后面的绿色条带是二甲苯青FF,相当于4000bp左右大小DNA的位置。
用琼脂糖作支持介质。另外,实验室常用的核酸染色剂是溴化乙锭(EB)。要注意观察凝胶时应根据染料不同使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带则不易观察,出现条带模糊的现象。其好处是染色效果好,操作方便,但是稳定性差,具有毒性。
两者作用不同。所有都要用。现在最安全的就是gelred核酸染料。可以替代EB。美国做过相关细胞实验,EB等很容易进去细胞,但是gelred进不去。而且gelred无毒,美国环保局证实,可以直接排放下水道! 。市面上假货很多,很多是EB勾兑的。所以还是查询美国官网biotium吧。或者查询中国官网北京博晟思远吧。
凝胶加载染料,紫色(6X)是NEB的主要凝胶加载染料,适用于尖锐,紧密的条带。无紫外线阴影。包含 Ficoll,用于更明亮、更紧密的表带。含有EDTA以阻止酶促反应。与琼脂糖和非变性聚丙烯酰胺凝胶相容。我们的紫色凝胶加载染料可锐化条带,并消除其他染料所见的紫外线阴影。
但是sybr green 的灵敏度不如EB,且背景荧光很强,但普通的核酸检测都能做到; gelred 是目前市场上最好的核酸染料,号称无毒,而且耐热,无背景荧光,但是加入量多容易引起拖带,当然价格也挺贵的。除此之外,国内有些不良商贩,拿AO(丫叮橙)做EB替代品,是剧毒致癌物质,且实验效果也不如EB。
琼脂糖凝胶电泳时胶中dna是靠荧光染色剂溴化乙锭发出荧光的。溴化乙锭为一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号,可用Polaroid底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
蓝色条带分别是溴酚蓝和二甲苯青FF(请注意不是二甲苯氰)。溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。希望能够对你有所帮助。
如果是环形病毒,两条条带一般是由于部分DNA发生了超螺旋而成,所以泡脚的时候跑到较快。
跑在前面的蓝色条带是溴酚蓝,位置大约相当于300bp的DNA,后面的绿色条带是二甲苯青FF,相当于4000bp左右大小DNA的位置。